实验室祖传

Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力

物品准备

1. 平板

2. 基质胶(使用带血清的培养基稀释9倍)

3. 枪头+移液枪

4. 20%血清培养基

5. 无血清培养基

操作步骤

1. 小室内液：用100μL无血清的培养基重悬待测细胞（RBE 25000个/孔，huccT1 ?个/孔 ），小心加入内室

2. 小室外液:在小室外孔中加入 500uL20%血清的培养基，作为小室外液

3. （若做侵袭）基质胶先稀释9倍（使用带血清培养基稀释），加入60ul至小室内。37℃细胞培养箱中孵育过夜使之平铺并凝固

4. 将之放置于 37摄氏度培养 24h。去除小室外液并小心吸去小室内液，操作时应避免触及小室，以免使细胞脱落。用棉签小心擦拭掉小室底部内膜的细胞。PBS·洗涤2遍。

5. 将500uL4%多聚甲醛加入到小室外孔中，放回小室固定15min后，PBS洗涤2遍。

6. 将0.1%结晶紫染色液加入到小室外孔中，将小室放置入染色液中染色15min，PBS洗涤3遍。

7. 在显微镜下观察迁移细胞并计数统计。

小室清洗

物品准备

1. 75%酒精

2. EDTA-胰酶

步骤

1. 将小室放入装有75%酒精的50ml离心管，放置于摇床（88rpm，10min）

2. 将小室放于24孔板（加入EDTA-胰酶 500ul——建议使用外用EDTA）中，小室内加100ulEDTA-胰酶,放置于37度培养箱24小时。

3. 使用时再次将小室放入装有75%酒精的50ml离心管，放置于摇床（88rpm，10min）。

4. 后倒置放置于操作台中（下面垫纸-喷75%酒精），紫外线消杀15min。

5. 后正置紫外线消杀15min