文章来源说明

物品准备

1. 细胞计数器

2. 六孔板

3. 结晶紫

4. 4%多聚甲醛

5. PBS

操作步骤

1. 将处于对数生长期的细胞胰酶消化后，完全培养基(基础培养基+10%胎牛血清重悬成细胞悬液，并计数。

2. 细胞接种:于6孔板培养板中各实验组接种1000个细胞/孔。(RBE种植1000个细胞，HUCCT1需要种植2000个)

3. 继续培养到14天(10天)或绝大多数单个克隆中细胞数大于50为止，中途每隔7天进行换液并观察细胞状态。

4. 克隆完成后，在显微镜下对细胞进行拍照，然后 PBS洗涤1次，每孔加入1mL·4%多聚甲醛固定 15min，PBS洗涤1次。

5. 每孔加入结晶紫染液1ml，染细胞 15min。

6. PBS洗涤细胞数次，晾干，数码相机拍照(分别对整个六孔板及每个孔进行单独拍照)。