🗒️😩鸽子的实验笔记-稳转细胞株的构建
2024-11-12
| 2024-11-12
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文章来源说明

目的细胞的培养

细胞复苏

细胞传代

细胞冻存

目的细胞的密度及药物筛选浓度确定

目的细胞的密度确定

过夜培养后密度达到80%为适宜

药物筛选浓度确定

使用不同浓度的抗生素对细胞进行处理,筛选出5-10天内使得细胞全部死亡的最低抗生素浓度。
抗生素
常见作用时间
常用浓度范围
嘌呤霉素
3-10天
1-10ug/ml
G418
100ug/ml~1000ug/ml
潮霉素
50ug/ml~1000ug/ml

慢病毒侵染目的细胞

1.根据公式计算病毒用量:
  1. 聚凝胺(Polybene)。
3.更换为新鲜培养基之后继续使用含有抗生素的选择培养基筛选10天左右,使得稳定表达的细胞得以保留。
4.通过有限稀释来进行稳转细胞株单克隆的筛选。
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