文章来源说明

物品准备

1. PBS

2. RIPA

3. PMSF

4. 温和细胞裂解液

5. 磁珠

6. 其他仪器。

实验步骤

1. 收集细胞，用预冷的PBS洗2遍，配置预先加入PMSF的温和细胞裂解液(100裂解液:1PMSF)并预冷。

2. 4摄氏度，1500rpm，5min离心，弃去上清，使用预先剪好的滤纸条将无法倒出的上清液吸干，而后加入适量裂解液于EP管中的1ml，置于冰上静置40min（每10min重吸一次）。

3. 4摄氏度，15000rpm，10min，取上清移入新的EP管。

4. 按400ul/管加入新的EP管中，并加入磁珠 30ul，放于4摄氏度冰箱中360度旋转摇床上过夜孵育。备注：本实验室磁珠已结合抗体，如选用试剂盒中的磁珠尚未结合抗体，则须提前将抗体与磁珠4摄氏度冰箱孵育过夜或37摄氏度孵育2h）。

5. 冰上操作IP洗涤液500ul，枪头吹，放置于磁力架，6次。后加30ul loading 。100摄氏度金属浴10min。使用磁力架吸附磁珠，将蛋白提取用于WB。