质粒转化

物品准备

1. 干粉质粒

2. 无菌水

3. 离心机

4. 摇床

5. 感受态细胞

6. 无菌EP管

7. 无抗性LB培养基

8. 有抗性的固体培养基

9. 移液枪、枪头、涂布棒

操作步骤

1. 干粉质粒在室温下离心机离心5000rpm，1min，加入无菌水20ul，充分混匀。

2. 取无菌EP管，加入1ul质粒，30ul感受态细胞，冰上放置30min

3. 激活：42摄氏度水浴90s，冰上2-3min。

4. 向EP管中加入无抗性LB培养基800ul，以37摄氏度，150rpm的速度于摇床上摇菌1h。

5. 待观察到浑浊后，将EP管置入离心机，2000rpm，3min离心，弃上清700ul，使用剩余液体重悬沉淀。

6. 取30-50ul至固体培养基，均匀涂布后倒置于37摄氏度培养箱过夜培养

扩大培养

物品准备

1. 移液枪、枪头

2. 有抗性的LB培养基（200mlLB培养基加入200ul氨苄）

3. 无菌EP管

4. 镊子

5. 甘油（如需保菌）

操作步骤

1. 取EP管，加入800ul有抗性的LB培养基

2. 取固体培养基，用镊子夹取白色枪头，挑取单克隆，置入提前准备好的EP管

3. 固定于摇床上，200rpm，37摄氏度下摇6-10小时

4. 待观察到EP管内液体浑浊，取400ul菌液，加入有抗性的LB培养基中，放置于摇床200rpm，37摄氏度摇晃12-16h，即可放置4度冰箱保存。

提取质粒

物品准备

1. 质粒提取试剂盒

操作步骤